鈣敏感受體(CaSR)是一種C類G蛋白偶聯受體,可感應細胞外的鈣離子水平。它主要在甲狀旁腺、腎臟的腎小管和大腦中表達。在甲狀旁腺中,它通過調節甲狀旁腺激素(PTH)的釋放來控制鈣的平衡。在血漿鈣濃度升高和鈣受體激活的情況下,PTH的釋放被抑制。細胞外側的鈣結合增加使受體發生構象變化,在細胞內側啟動磷脂酶C途徑,大概是通過Gqα型的G蛋白,最終增加細胞內的鈣濃度,抑制甲狀旁腺激素的囊泡融合和外滲。它還能抑制cAMP依賴性途徑。
本試劑盒小鼠CASR免疫測定是一種三步法固相夾心ELISA,用于測量細胞培養上清液、血清和血漿中的小鼠CASR。試劑盒包含大腸桿菌表達重組小鼠CASR和針對重組蛋白產生的抗體。使用天然小鼠CASR獲得的結果顯示出與使用重組標準品獲得的標準曲線平行的線性曲線。這些結果表明,該試劑盒可用于測定天然小鼠CASR的相對質量值。
檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術:將捕獲抗體包被于酶標板上,捕獲樣品及標準品中的待測物CASR,孵育清洗后,再加入生物素標記的檢測抗體進行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯的辣根過氧化物酶進行孵育,待孵育結束后清洗,接著加入TMB顯色液后,若樣本中有待測物則顯藍色,則加入終止液停止反應。檢測過程中游離的成分均被洗去,用酶標儀在450nm處測OD值,顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣本中CASR的濃度。
雙抗體夾心模式圖
按操作順序形成抗體夾心結構后,加入TMB 底物,板孔液體由無色變成藍色,再加入終止液變為黃色后進行吸光度值測定。
檢測實驗的局限性
僅供科研使用,不能用于臨床診斷或治療。
試劑盒的使用期限不得超過試劑盒標簽上的有效期。不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合使用或替換使用。
如果樣品產生的值高于最高標準,則用測定稀釋劑進一步稀釋樣品,并重復測定。稀釋劑、實驗員、移液技術、洗滌技術、培養時間或溫度以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導致結合變化。
樣本采集、處理和存儲的變化可能會導致樣本值的差異。
本試劑盒實驗設計消除了不同生物樣品中可能潛在的干擾因素的影響,但并不能涵蓋所有潛在影響因素。不能排除存在其他干擾的可能性。
操作要點
混合蛋白質溶液時,應始終避免起泡。為了避免交叉污染,在添加每個標準品、樣品和試劑時應更換移液器槍頭。此外,每種試劑應單獨使用容器。
確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準確的結果,在孵育步驟中需要粘合好封板膜。
當使用自動洗板機時,在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期,或者在洗滌步驟之間將板旋轉180度,可以提高測定精度。
顯色劑應保持無色,直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應從無色變為藍色。
應按照與顯色劑相同的順序將終止液添加到板中。加入終止液后,孔中形成的顏色將從藍色變為黃色。綠色的孔表示終止液未與基質溶液充分混合。
試劑盒組成及儲存條件
名 稱規格(48T)規格(96T)儲存條件
預包被酶標板8×6條8×12條未用完的酶標板密封干燥保存可于2-8℃儲存至多1個月。
標準品1支×100μL1支×200μL每次測試按需配置標準品,剩余置于2-8℃儲存至多6個月。
100×生物素化抗體1支×50μL1支×100μL每次測試按需配置抗體工作液,剩余置于2-8℃儲存至多6個月。
100×SA-HRP1支×50μL1支×100μL每次測試按需配置酶結合物工作液,剩余置于2-8℃儲存至多6個月。
20×濃縮稀釋液1支×15mL1支×25mL置于2-8℃可保存至有效期末。
顯色劑A1支×3mL1支×6mL
顯色劑B1支×3mL1支×6mL
終止液1支×3mL1支×6mL
20×濃縮洗滌液1支×15mL1支×25mL
封板膠紙2張2張
產品說明書1份1份
需要的其他材料
?酶標儀,包含450nm測定波長,同時包含600-680nm校正波長更佳;
?移液器及槍頭;
?蒸餾水或去離子水;
?100-1000 mL刻度量筒;
?洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機;
?水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;
?用于稀釋標準品和樣品的試管。
注意事項
此試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液,具有一定腐蝕性,應謹慎操作。
該試劑盒中的某些成分含有防腐劑,可能會引起皮膚過敏反應,應佩帶口罩避免吸入薄霧。
顯色劑B可能會引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激,應佩帶口罩避免吸入薄霧。
佩戴防護手套、防護服、眼睛和面部防護用品。處理后徹底洗手。